黃曲霉毒素親和柱測定的基礎(chǔ)是抗原、抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后緩慢的通過黃曲霉毒素B1免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素B1,然后注入到分析儀器中用于檢測。
黃曲霉毒素親和柱的用途
免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的黃曲霉毒素,從而對樣品起到非常針對性的凈化作用,過柱凈化后的樣品液可直接用于 HPLC 分析或處理后用熒光光度計檢測。
親和柱與 HPLC 或熒光光度計配合使用可達(dá)到快速測定的目的,以改善信噪比,可提高檢測方法的準(zhǔn)確度。
黃曲霉毒素親和柱的使用注意事項
● 使用前,免疫親和柱需回至室溫(22~25℃)。
● 親和柱2~8℃儲存,不得凍存。
● 不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
● 取樣量:根據(jù)需要可以適當(dāng)增加或減少取樣量,注意提取液量要相應(yīng)改變。
● 柱容量:300ng,當(dāng)樣本中待檢毒素的含量除以稀釋倍數(shù)高于柱容量時,需要適當(dāng)降低上樣液的體積,重新檢測。
● PH:親和柱的上樣溶液pH需在6~8之間,若偏離此范圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。
● 上機檢測時的溶劑與流動相保持一致可以消除溶劑效應(yīng)的影響。
● 黃曲霉毒素B1可致癌,應(yīng)戴手套口罩等防護(hù)工具操作。
● 使用過的容器及黃曲霉毒素B1溶液用次氯酸鈉溶液(5%V/V)浸泡過夜。